什么是暗視野顯微鏡?

什么是暗視野顯微鏡呢?與其它顯微鏡有什么不同的特點(diǎn)?如何操作呢?我們帶著問(wèn)題再一起來(lái)看看暗視野顯微鏡吧.

(一) 原理和結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
在日常生活中，室內(nèi)飛揚(yáng)的微粒灰塵是不易被看見(jiàn)的，但在暗的房間中若有一束光線(xiàn)從門(mén)縫斜射進(jìn)來(lái)，灰塵便粒粒可見(jiàn)了，這是光學(xué)上的丁達(dá)爾現(xiàn)象。暗視野顯微鏡就是利用此原理設(shè)計(jì)的。它的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)主要是使用中央遮光板或暗視野聚光器，常用的是拋物面聚光器，使光源的中央光束被阻擋．不能由下而上地通過(guò)標(biāo)本進(jìn)入物鏡。從而使光線(xiàn)改變途徑，傾斜地照射在觀察的標(biāo)本上，標(biāo)本遇光發(fā)生反射或散射，散射的光線(xiàn)投入物鏡內(nèi)，因而整個(gè)視野是黑暗的。在暗視野中所觀察到的是被檢物體的衍射光圖像．并非物體的本身，所以只能看到物體的存在和運(yùn)動(dòng)，不能辨清物體的細(xì)微結(jié)構(gòu)。但被檢物體為非均質(zhì)時(shí)，并大于1／2波長(zhǎng)，則各級(jí)衍射光線(xiàn)同時(shí)進(jìn)入物鏡，在某種程度上可觀察物體的構(gòu)造。一般暗視野顯微鏡雖看不清物體的細(xì)微結(jié)構(gòu)，但卻可分辨0.004um以上的微粒的存在和運(yùn)動(dòng)，這是普通顯微鏡(最大的分辨力為0.2um)所不具有的特性，可用以觀察活細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和細(xì)胞內(nèi)微粒的運(yùn)動(dòng)等。

(二) 制作中央遮光板
普通顯微鏡只要聚光器是可以拆卸的，支架的口徑適于安裝暗視野聚光器，即可改裝成暗視野顯微鏡。在無(wú)暗視野聚光器時(shí)，可用厚黑紙片制作一個(gè)中央遮光板，放在普通顯微鏡的聚光器下方的濾光片框上，也能得到暗視野效果。

(1)．將顯微鏡聚光器調(diào)到最高位置，用低倍鏡對(duì)好焦距。

(2)．取下目鏡，從鏡筒中觀察并調(diào)節(jié)光闌的大小，使其與鏡筒中所見(jiàn)物鏡的視野相等。

(3)．用厚黑紙剪制中央擋光板。外圈直徑與濾光片框架相同，中央部分的大小與調(diào)節(jié)好的光闌孔徑一樣(可用半透明的小紙片，放在通光孔處聚光鏡鏡面上，紙上顯示的光斑即為光闌的孔徑，再用圓規(guī)量取大小)。

(4)．將中央擋光板放在濾光片框架上，開(kāi)大光闌進(jìn)行樣品觀察。
如需使用高倍鏡作暗視野觀察，應(yīng)按高倍鏡對(duì)焦后的視野大小重新制作中央擋光板。
保存好各自制作的中央遮光板，以便在后面的實(shí)驗(yàn)中使用。

（三）使用方法
(1)．把暗視野聚光器裝在顯微鏡的聚光器支架上。

(2)．選用強(qiáng)的光源，但又要防止直射光線(xiàn)進(jìn)入物鏡，所以一般用顯微鏡燈照明。

(3)．在聚光器和標(biāo)本片之間要加一滴香柏油，目的是不使照明光線(xiàn)于聚光鏡上面進(jìn)行全反射，達(dá)不到被檢物體，而得不到暗視野照明。

(4)．升降集光器，將集光鏡的焦點(diǎn)對(duì)準(zhǔn)被檢物體，即以圓錐光束的頂點(diǎn)照射被檢物。如果聚光器能水平移動(dòng)并附有中心調(diào)節(jié)裝置，則應(yīng)首先進(jìn)行中心調(diào)節(jié)，使聚光器的光軸與顯微鏡的光軸嚴(yán)格位于一直線(xiàn)上。

(5)．選用與聚光器相應(yīng)的物鏡，調(diào)節(jié)焦距＜操作方法與普通顯微鏡相同＝，找到所需觀察的物像。

（四）觀察
觀察示教臺(tái)上暗視野顯微鏡下的活細(xì)胞。在黑暗的背景里，可見(jiàn)細(xì)胞、細(xì)胞核和細(xì)胞器的衍射光圖像。